ABSTRACT
ABSTRACT Objective. The digestibility of specific dsRNA by action of the enzymes of digestive tract of the whiteleg shrimp Litopenaeus vannamei was determined in vitro. Materials and methods. Digestive enzyme activity (amylase, lipase, protease, DNase and RNase) was measured in the stomach, digestive gland, and anterior, middle, and posterior intestine of juvenile shrimp, and the digestibility of DNA, RNA and the dsRNA-ORF89, specific to WSSV, was determined by in vitro assays, as well as electrophoretic and densitometric analyses. Results. The highest enzymatic activity was found in the digestive gland: amylase (81.41%), lipase (92.60%), protease (78.20%), DNase (90.85%), and RNase (93.14%). The highest digestive capacity against DNA, RNA, and dsRNA was found in the digestive gland (5.11 ng of DNA per minute, 8.55 ng of RNA per minute, and 1.48 ng dsRNA per minute). Conclusions. The highest digestibility of dsRNA-ORF89, specific to WSSV, was found in the digestive gland, whereas the lowest digestibility was observed in the posterior intestine. This is the first report regarding the digestibility of dsRNA-ORF89 by whiteleg shrimp digestive tract enzymes, with potential therapeutic importance in shrimp culture to prevent WSSV disease through balanced feed.
RESUMEN Objetivo. La digestibilidad del dsRNA específico para el virus de la mancha blanca (WSSV) por acción de las enzimas del tracto digestivo del camarón Litopenaeus vannamei fue analizada in vitro. Materiales y métodos. Se midió la actividad de enzimas digestivas (proteasa, amilasa, lipasa, ADNasa y ARNasa) en el estómago, la glándula digestiva, el intestino anterior, medio y posterior en juveniles de camarón patiblanco y se evaluó la digestibilidad de ácidos nucleicos ADN, ARN y dsRNA-ORF89 especifico contra el virus WSSV, por análisis electroforéticos y densitometría. Resultados. La actividad enzimática más alta se encontró en la glándula digestiva del camarón: amilasa (81.41%), lipasa (92.60%), proteasa (78.20%), ADNasa (90.85%) y ARNasa (93.14%). Se evidenció la capacidad digestiva del camarón patiblanco contra el ADN, ARN y dsRNA-ORF89 encontrando en la glándula digestiva la mayor digestión (5.11 ng de ADN por minuto, 8.55 ng de ARN por minuto y 1.48 ng de dsRNA por minuto). Conclusiones. La mayor digestibilidad del dsRNA-ORF89, específico contra el virus WSSV, se encontró en la glándula digestiva y la menor en el intestino posterior. Este es el primer informe relacionado con la digestibilidad del dsRNA-ORF89 por las enzimas del camarón patiblanco con potencial importancia terapéutica en el cultivo de camarón para prevenir la enfermedad del WSSV a través del alimento balanceado.
ABSTRACT
Objetivo.Evaluar el efecto de cinco niveles de proteína cruda (PC) en alimentos balanceados sobre el crecimiento, sobrevivencia y tasa de conversión alimenticia (FCA) en juveniles de Macrobrachium tenellum. Materiales y métodos. Se alimentó por 60 días a juveniles de M. tenellum (0.31±0.01 g y 32.62±1.10 mm) con niveles de 20, 25, 30, 35 y 40% de PC en el alimento. Los organismos fueron distribuidos al azar en 15 tinas experimentales de 64 L (15 org./tina) bajo condiciones controladas (5.95±0.41 ppm de oxígeno, 29.89±0.72°C, y pH 8.44±0.15) y alimentados con el 10% de su peso vivo. Resultados. El porcentaje de sobrevivencia fue del 98.22±3.96% sin diferencias significativas entre los tratamientos (p>0.05). Los organismos alimentados con un 40% de PC tuvieron un peso significativamente mayor (p<0.05) respecto a los demás tratamientos (cambio de peso de 0.54±0.02g; incremento de peso de 173.60±12.99%; y tasa de crecimiento específico de 1.68±0.08). El FCA fue significativamente mejor (p<0.05) en los organismos alimentados con 35 y 40% de PC (2.85±0.18 y 2.40±0.05, respectivamente) que los demás tratamientos. Conclusiones. Los organismos juveniles de M. tenellum alimentados con niveles altos de proteína (40%), se desarrollaron más rápido que organismos que recibieron una menor concentración de proteína bajo las condiciones experimentales establecidas en este estudio.
Objective. To evaluate the effect of five levels of crude protein (CP) in balanced feed on the survival, growth and feed conversion ratio (FCA) in juveniles of Macrobrachium tenellum. Materials and methods. Juveniles of M. tenellum (0.31±0.01g and 32.62±1.10mm) were fed for 60 days with 20, 25, 30, 35 and 40% of CP in feed. The organisms were randomly distributed in 15 experimental tanks (15 org /tank) under controlled conditions (5.95±0.41 ppm of oxygen, 29.89 ± 0.72 °C, and pH 8.44±0.15) and fed with 10% of its live weight. Results. The survival percentage was 98.22±3.96% with no statistical difference between treatments (p>0.05). The organisms fed with 40% CP in their diet had a significantly higher weight (p<0.05) compared to the other treatments (weight change of 0.54±0.02g; weight increase 173.60±12.99%, and specific growth rate of 1.68±0.08). The FCA was significantly better (p<0.05) in organisms fed with 35 and 40% CP (2.85±0.18 and 2.40±0.05, respectively) than other treatments. Conclusions. Juveniles of M. tenellum fed with high protein levels (40%) developed faster than organisms which received a lower concentration of the protein under the experimental conditions established for this study.
Subject(s)
Dietary Proteins , Food , Growth , Nutritional Sciences , PalaemonidaeABSTRACT
En el presente trabajo se optimizaron las condiciones de extracción de esterasas con actividad en interfaces, a partir de la anémona marina Stichodactyla helianthus y del camarón peneido Litopenaeus vannamei Las esterasas interfaciales, cuya presencia en estas especies había sido informada previamente, presentan características funcionales que las hacen muy atractivas para su empleo industrial. Los homogenados de los animales se trataron con los detergentes Tritón X-100, Tween 20 y Tween 80 en dos concentraciones cada uno: la Concentración Micelar Crítica (CMC) y la mitad de ésta. Además se empleó NaCl 0,5 mol/L y n-butanol a las proporciones 5, 10 y 20%. Cada variante fue comparada con el método tradicional de extracción con agua destilada, que fue tomado como control. Los mejores resultados se obtuvieron empleando n-butanol al 20%, para recuperar las actividades esterasa y fosfolipasa, y al 10%, en el aislamiento de la actividad lipasa. La efectividad de este solvente en el aislamiento de estas enzimas con afinidad por las interfaces lípido/agua, pudiera estar dada por su capacidad para romper los agregados entre estas moléculas y causar la desorción de las mismas a los restos de membrana y tejidos presentes en la preparación.
Interfacial esterases present great functional versatility, making them very attractive molecules for industrial applications. The conditions for extracting interfacial esterases previously detected in the sea anemone Stichodactyla helianthus and the shrimp Litopenaeus vannamei were optimised in this work. Animal homogenates were treated with Triton X-100, Tween 20 and Tween 80 detergents at two different concentrations: critical micellar concentration (CMC) and half of that concentration; 0.5 mol/L NaCl and n-butanol at 5%, 10% and 20% v/v ratios were also tested. Each procedure was compared to the control extraction method using distilled water. The best results were obtained with 20% n-butanol for recovering esterase and phospholipase activity whilst 10% n-butanol extraction was the most effective for lipase activity isolation. This solventâs suitability for isolating interface-activated enzymes could be explained by its ability to dissociate biomolecule aggregates and cause enzyme desorption from the membranes and tissues remaining in the preparation.